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NIBSC 瘦素(WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品)

產(chǎn)品時(shí)間:2022-03-04

簡(jiǎn)要描述:

NIBSC 97/626 瘦素(WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品)在 1999 年由世界衛(wèi)生組織生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會(huì)在八個(gè)實(shí)驗(yàn)室的國(guó)際合作研究中進(jìn)行評(píng)估后,被確立為瘦素、小鼠序列的第一個(gè)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn) (IS)


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世界衛(wèi)生組織國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)

瘦素、小鼠、rDNA 衍生

NIBSC 97/626

酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
五.表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。
七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。

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